PCR溫度循環(huán)儀（又稱PCR儀或熱循環(huán)儀）是分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中用于執(zhí)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）的關(guān)鍵設(shè)備。它通過精確控制溫度變化，實(shí)現(xiàn)DNA模板的變性、引物退火和產(chǎn)物延伸的循環(huán)過程，從而在體外高效擴(kuò)增特定DNA片段。正確操作儀器不僅能確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和重復(fù)性，還能延長設(shè)備使用壽命。

操作流程詳解

以下是綜合多個品牌PCR儀（如伯樂Bio-Rad、ABI Veriti等）的通用操作步驟：

一、開機(jī)與準(zhǔn)備

接通電源，打開儀器背部主開關(guān)。

儀器自動進(jìn)行自檢（SelfTest），完成后進(jìn)入待機(jī)狀態(tài)（Ready）。

將配制好的PCR反應(yīng)管或96孔板放入樣品槽中，關(guān)閉熱蓋。

二、程序設(shè)置方式

不同型號PCR儀提供多種程序創(chuàng)建方式，主要包括手動編輯和自動向?qū)煞N。

三、核心參數(shù)配置

在設(shè)置程序時，需重點(diǎn)配置以下參數(shù)：

熱蓋溫度：通常設(shè)為99–105℃，防止樣品蒸發(fā)；壓力默認(rèn)約90N。

初始變性：94–95℃維持2–5分鐘，確保模板全部解鏈。

循環(huán)步驟：

變性：94–95℃，15–30秒；

退火：根據(jù)引物Tm值設(shè)定，通常50–65℃，30秒；

延伸：72℃，按1 kb/min計(jì)算時間。

循環(huán)次數(shù)：一般25–35次，過多可能導(dǎo)致非特異產(chǎn)物積累。

最終延伸：72℃，5–10分鐘，確保所有產(chǎn)物完整合成。

四、運(yùn)行與監(jiān)控

設(shè)置完成后，點(diǎn)擊 Run → Start Now 啟動程序。

可通過屏幕查看當(dāng)前運(yùn)行狀態(tài)、剩余時間等信息。

如需暫?；蚪K止，使用 Pause 或 Stop 功能。

五、關(guān)機(jī)與維護(hù)

程序結(jié)束后，及時取出樣品。

清潔樣品槽和熱蓋，保持儀器干燥。

定期校準(zhǔn)溫度以保證準(zhǔn)確性。

建議

使用前務(wù)必閱讀說明書，了解具體型號的功能限制（如zui大升溫速率、支持管型等）。

定期維護(hù)和校準(zhǔn)儀器，確保溫度控制精度。

若出現(xiàn)非特異條帶，可嘗試調(diào)整退火溫度或啟用梯度功能尋找zuiyou條件。

實(shí)驗(yàn)完成后及時清理樣品槽，避免污染。