楔子：近期王老師一直奔波于祖國的大江南北，一路追逐雷電的蹤跡之余，也同時(shí)和廣大小伙伴們溝通交流液相色譜的使用的心得體會(huì)，望著窗外的大雨磅礴，寫下如下對于液相色譜的養(yǎng)護(hù)秘訣，希望能給所有實(shí)驗(yàn)室的小伙伴們帶來收獲和啟發(fā)！
在液相色譜儀的精密世界中，每一個(gè)部件都扮演著重要的角色。它們協(xié)同工作，將復(fù)雜的混合物分離成單一的純凈組分，為我們揭示樣品的秘密。然而，就像任何高精度的儀器一樣，液相色譜儀也需要定期的維護(hù)與保養(yǎng)，以確保其長期穩(wěn)定運(yùn)行和準(zhǔn)確的分析結(jié)果。接下來，就讓我們一起探索液相色譜儀六大核心部件的細(xì)致養(yǎng)護(hù)秘訣，讓這臺(tái)“化學(xué)偵探”始終保持最佳狀態(tài)！
流動(dòng)相溶劑瓶：清澈的起點(diǎn)
流動(dòng)相溶劑瓶，如同液相色譜儀的“水源地”，其清澈與純凈直接關(guān)系到整個(gè)分析過程的準(zhǔn)確性。為了確保溶劑的純凈，我們需要定期更換溶劑，并檢查溶劑瓶的密封性，避免外界污染物的侵入。同時(shí)，對于易揮發(fā)的有機(jī)溶劑，如乙腈，我們應(yīng)使用棕色溶劑瓶存儲(chǔ)，減少光照引起的聚合反應(yīng)，最好是能做到每天進(jìn)行超聲和過濾。這一過程就像是為“水源地”定期換水和濾水，確保水質(zhì)清澈，為整個(gè)分析流程提供堅(jiān)實(shí)的保障。
高壓泵：心臟的穩(wěn)定律動(dòng)
高壓泵，作為液相色譜儀的“心臟”，其穩(wěn)定的工作狀態(tài)對于整個(gè)系統(tǒng)的運(yùn)行至關(guān)重要。為了保持高壓泵的穩(wěn)定輸出，我們需要定期檢查并清洗流路系統(tǒng)，確保流動(dòng)相中無氣泡、無雜質(zhì)。同時(shí)，注意檢查過濾頭和單向閥是否堵塞，及時(shí)超聲清洗或更換，避免堵塞導(dǎo)致的壓力波動(dòng)。這一過程就像是給“心臟”做定期體檢，確保它始終保持穩(wěn)定的律動(dòng)。當(dāng)然，想要一個(gè)穩(wěn)壓的高壓泵，泵本身的設(shè)計(jì)也非常重要的，能主動(dòng)壓力脈動(dòng)抑制的高壓泵，才是智能的好的輸液泵?？浦Z美憑著強(qiáng)大的研發(fā)實(shí)力，逐代迭代，開發(fā)出能主動(dòng)進(jìn)行壓力脈動(dòng)的超高壓輸液泵，雙重保證了流速的穩(wěn)定和壓力的平穩(wěn)。
自動(dòng)和手動(dòng)進(jìn)樣器：樣品的精準(zhǔn)傳遞
進(jìn)樣器，作為樣品的“守門員”，其精準(zhǔn)傳遞樣品的能力直接影響到分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。為了確保進(jìn)樣器的正常工作，我們需要定期清洗進(jìn)樣針和進(jìn)樣器，避免樣品殘留導(dǎo)致的交叉污染。同時(shí)，對于手動(dòng)進(jìn)樣器，我們還需注意操作技巧，如使用專用進(jìn)樣針、插針到底、及時(shí)清洗等，確保樣品的精準(zhǔn)傳遞。這一過程就像是訓(xùn)練一位精準(zhǔn)的“守門員”，確保每一次傳遞都準(zhǔn)確無誤。
色譜柱：分離的藝術(shù)殿堂
色譜柱，作為液相色譜儀的“靈魂”，其高效的分離能力是整個(gè)分析過程的核心。為了保護(hù)色譜柱，我們需要避免壓力和溫度的急劇變化，選擇合適的流動(dòng)相，避免將復(fù)雜樣品直接注入柱內(nèi)等。同時(shí)，定期用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱，清除殘留雜質(zhì)，保持其高效分離能力。這一過程就像是維護(hù)一座“藝術(shù)殿堂”，確保它始終保持著最佳的分離效果。
01 避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動(dòng)。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會(huì)影響柱內(nèi)的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會(huì)沖動(dòng)柱內(nèi)填料，因此在調(diào)節(jié)流速時(shí)應(yīng)該緩慢進(jìn)行，在閥進(jìn)樣時(shí)閥的轉(zhuǎn)動(dòng)不能過緩(如前所述)。
02 應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成，特別是反相色譜中，不應(yīng)直接從有機(jī)溶劑改變?yōu)槿渴撬粗嗳弧?br />
03 色譜柱反沖，反沖能快速?zèng)_出雜質(zhì)和降低本身壓力，但是一定根據(jù)具體情況確認(rèn)是否反沖， 不是所有色譜柱都能反沖的。
04 選擇使用適宜的流動(dòng)相(尤其是pH)，以避免固定相被破壞。有時(shí)可以在進(jìn)樣器前面連接一預(yù)柱，分析柱是鍵合硅膠時(shí)，預(yù)柱為硅膠，可使流動(dòng)相在進(jìn)入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和”，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。
05 避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內(nèi)，需要對樣品進(jìn)行預(yù)處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一保護(hù)柱。保護(hù)柱一般是填有相似固定相的短柱。保護(hù)柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換。
06 經(jīng)常用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱，清除保留在柱內(nèi)的雜質(zhì)。在進(jìn)行清洗時(shí)，對流路系統(tǒng)中流動(dòng)相的置換應(yīng)以相混溶的溶劑逐漸過渡，每種流動(dòng)相的體積應(yīng)是柱體積的20倍左右，即常規(guī)分析需要50~75ml。
下面列舉一些色譜柱的清洗溶劑及順序，作為參考：
硅膠柱以正已烷(或庚烷)、二氯甲烷和甲醇依次沖洗，然后再以相反順序依次沖洗，所有溶劑都必須嚴(yán)格脫水。甲醇能洗去殘留的強(qiáng)極性雜質(zhì)，已烷使硅膠表面重新活化。
反相柱以水、甲醇、乙腈、一氯甲烷(或氯仿)依次沖洗，再以相反順序依次沖洗。
如果下一步分析用的流動(dòng)相不含緩沖液，那么可以省略最后用水沖洗這一步。一氯甲烷能洗去殘留的非極性雜質(zhì)，在甲醇(乙腈)沖洗時(shí)重復(fù)注射100~200µl*數(shù)次有助于除去強(qiáng)疏水性雜質(zhì)。*與乙腈或甲醇的混合溶液能除去類脂。有時(shí)也注射二甲亞砜數(shù)次。此外，用乙腈、丙酮和三氟醋酸(0.1%)梯度洗脫能除去蛋白質(zhì)污染。
陽離子交換柱可用稀酸緩沖液沖洗，陰離子交換柱可用稀堿緩沖液沖洗，除去交換性能強(qiáng)的鹽，然后用水、甲醇、二氯甲烷(除去吸附在固定相表面的有機(jī)物)、甲醇、水依次沖洗。
07 保存色譜柱時(shí)應(yīng)將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發(fā)干燥。禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置過晚上或更長時(shí)間。
08 色譜柱使用過程中，如果壓力升高，一種可能是燒結(jié)濾片被堵塞，這時(shí)應(yīng)更換濾片或?qū)⑵淙〕鲞M(jìn)行清洗；另一種可能是大分子進(jìn)入柱內(nèi)，使柱頭被污染；如果柱效降低或色譜峰變形，則可能柱頭出現(xiàn)塌陷，死體積增大。
09 通常以硅膠為基質(zhì)的色譜柱，只能在pH2~9范圍內(nèi)使用。柱子使用一段時(shí)間后，可能有一些吸附作用強(qiáng)的物質(zhì)保留于柱頂，特別是一些有色物質(zhì)更易看清被吸著在柱頂?shù)奶盍仙?。新的色譜柱在使用一段時(shí)間后柱頂填料可能塌陷，使柱效下降，這時(shí)也可補(bǔ)加填料使柱效恢復(fù)。
每次工作完后，要用洗脫能力強(qiáng)的洗脫液梯度沖洗，例如ODS柱宜用甲醇水沖洗至基線平衡。當(dāng)采用鹽緩沖溶液作流動(dòng)相時(shí)，使用完后應(yīng)用無鹽對應(yīng)流動(dòng)相沖洗。含鹵族元素(氟、氯、溴)的化合物可能會(huì)腐蝕質(zhì)不銹鋼管道，不宜長期與之接觸。
檢測器：敏銳的“眼睛”
檢測器，作為液相色譜儀的“眼睛”，其敏銳的捕捉能力對于分析結(jié)果的準(zhǔn)確性至關(guān)重要。為了保持檢測器的敏銳度，我們需要定期清洗和檢查檢測器的外殼和內(nèi)部光路系統(tǒng)，確保無灰塵、無污染物。同時(shí)，注意避免強(qiáng)光和強(qiáng)電磁場的干擾，確保檢測器能夠準(zhǔn)確捕捉樣品信號。這一過程就像是給“眼睛”做定期保養(yǎng)，確保它始終保持著敏銳的捕捉能力。
系統(tǒng)整體：和諧的交響樂
除了以上五大核心部件的保養(yǎng)外，我們還需要注意系統(tǒng)整體的養(yǎng)護(hù)。這包括定期更換系統(tǒng)內(nèi)的過濾器、檢查管路連接是否緊固、避免長時(shí)間停機(jī)導(dǎo)致系統(tǒng)內(nèi)部干燥等。同時(shí)，保持實(shí)驗(yàn)室的清潔和整潔也是非常重要的，避免灰塵和污染物對儀器造成損害。這一過程就像是維護(hù)一支和諧的交響樂團(tuán)隊(duì)，確保每個(gè)部件都能夠在最佳狀態(tài)下協(xié)同工作，共同演奏出美妙的科學(xué)樂章。
在養(yǎng)護(hù)液相色譜儀的過程中，我們不僅要注意技術(shù)細(xì)節(jié)，更要培養(yǎng)一種對科學(xué)的敬畏之心和對儀器的愛護(hù)之情。通過細(xì)心呵護(hù)這些精密的儀器，我們能夠更好地探索科學(xué)的奧秘，為人類的進(jìn)步和發(fā)展貢獻(xiàn)自己的力量。
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