一、實(shí)驗(yàn)背景與核心目的

益生菌作為對(duì)宿主健康有益的活性微生物，其應(yīng)用效果與菌體密度、活性保持密切相關(guān)。傳統(tǒng)益生菌濃縮方法（如常規(guī)離心、過濾濃縮）存在濃縮效率低、菌體活性易受溫度或機(jī)械力破壞、濃縮后菌體密度不足等問題，限制了益生菌產(chǎn)品的研發(fā)與生產(chǎn)。

低溫真空離心濃縮技術(shù)融合了低溫保護(hù)、真空降沸、離心防暴沸三大優(yōu)勢(shì)：在 4℃低溫環(huán)境下可大限度保留益生菌活性，真空條件降低溶劑（水）沸點(diǎn)實(shí)現(xiàn)快速蒸發(fā)，1500rpm 離心力有效避免樣品暴沸導(dǎo)致的菌體流失，三者協(xié)同作用能高效濃縮菌懸液、提升菌體密度。本次實(shí)驗(yàn)采用凈信低溫真空離心濃縮儀，以模擬益生菌發(fā)酵液的菌懸液為處理對(duì)象，核心目的包括：① 評(píng)估低溫真空離心濃縮技術(shù)用于益生菌預(yù)濃縮的可行性；② 驗(yàn)證該技術(shù)在濃縮過程中對(duì)益生菌活性的保護(hù)效果；③ 觀察濃縮產(chǎn)物的形態(tài)、均一性，為益生菌規(guī)?；瘽饪s工藝提供技術(shù)參考與新思路。

二、實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備

（一）實(shí)驗(yàn)材料

酵母粉（用于模擬益生菌發(fā)酵液中的菌體成分，提供微生物載體）；

PBS 緩沖液（pH 7.2-7.4，用于制備菌懸液，維持體系滲透壓穩(wěn)定，保護(hù)菌體形態(tài)）；

無菌超純水（用于儀器清潔，避免污染）。

（二）實(shí)驗(yàn)設(shè)備

凈信低溫真空離心濃縮儀（核心處理設(shè)備，具備低溫控溫、真空調(diào)控、離心轉(zhuǎn)速精準(zhǔn)設(shè)定功能）；

手持勻漿儀（用于菌懸液制備，確保菌體均勻分散）；

50ml 無菌離心管（用于樣品裝載與儲(chǔ)存）；

電子天平（精度 0.01g，用于酵母粉稱量）；

移液管（100ml、5ml 規(guī)格，用于溶液量取與樣品分裝）；

油泵（配套濃縮儀，提供真空環(huán)境）；

冷阱（用于冷凝溶劑，維持真空系統(tǒng)穩(wěn)定性，控溫可達(dá) - 70℃）；

生物安全柜（用于樣品制備，保證無菌環(huán)境）。

三、實(shí)驗(yàn)工藝參數(shù)與操作步驟

（一）核心工藝參數(shù)

參數(shù)類型

設(shè)定值

備注

樣品初始量

5ml / 管（共 2 管）

采用平行樣設(shè)計(jì)，保證實(shí)驗(yàn)重復(fù)性

離心轉(zhuǎn)速

1500rpm

溫和離心力，避免菌體機(jī)械損傷

濃縮溫度

4℃

低溫環(huán)境保護(hù)益生菌活性，避免熱失活

濃縮時(shí)間

4h

確保溶劑充分蒸發(fā)，達(dá)到干粉狀態(tài)

冷阱溫度

-70℃

快速冷凝蒸發(fā)的溶劑，維持系統(tǒng)高真空度

（二）詳細(xì)操作步驟

菌懸液制備：在生物安全柜中，用電子天平準(zhǔn)確稱量 5g 酵母粉，緩慢加入 100ml 無菌 PBS 緩沖液中；啟動(dòng)手持勻漿儀，將混合液充分混勻，確保酵母粉（模擬益生菌）均勻分散，無明顯結(jié)塊，制備成均一的菌懸液。

樣品分裝：使用 5ml 移液管，將制備好的菌懸液分別裝入兩個(gè)無菌 50ml 離心管中，每管分裝 5ml，做好標(biāo)記（樣品 1、樣品 2），作為平行實(shí)驗(yàn)樣品。

儀器調(diào)試與預(yù)處理：① 打開低溫真空離心濃縮儀，檢查儀器密封性、制冷系統(tǒng)及離心模塊是否正常；② 開啟油泵與冷阱，設(shè)定冷阱制冷溫度為 - 70℃，等待冷阱溫度穩(wěn)定（波動(dòng)≤±2℃）；③ 將兩個(gè)裝有樣品的離心管對(duì)稱放入濃縮儀轉(zhuǎn)子中，確保轉(zhuǎn)子平衡，避免離心過程中出現(xiàn)振動(dòng)。

參數(shù)設(shè)定與啟動(dòng)：在濃縮儀操作界面設(shè)定參數(shù)：離心轉(zhuǎn)速 1500rpm、濃縮溫度 4℃、濃縮時(shí)間 4h，確認(rèn)參數(shù)無誤后，點(diǎn)擊 “啟動(dòng)” 按鈕，儀器開始運(yùn)行（離心、制冷、真空系統(tǒng)同步工作）。

過程監(jiān)控與結(jié)束操作：濃縮過程中，實(shí)時(shí)觀察儀器運(yùn)行狀態(tài)（真空度、溫度、轉(zhuǎn)速是否穩(wěn)定），記錄無異常；4h 后儀器自動(dòng)停機(jī)，關(guān)閉油泵與冷阱，待系統(tǒng)真空度恢復(fù)至常壓后，打開儀器艙門，取出樣品離心管，密封標(biāo)記。

四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

（一）濃縮產(chǎn)物形態(tài)與均一性

觀測(cè)指標(biāo)

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

產(chǎn)物形態(tài)

兩管樣品均濃縮為干粉狀，無殘留液體，粉末疏松細(xì)膩

均一性

兩個(gè)平行樣品的干粉顏色、疏松度一致，無局部結(jié)塊或不均勻現(xiàn)象，濃縮均一性良好

菌體回收率

濃縮后干粉質(zhì)量穩(wěn)定，無明顯菌體流失（通過視覺觀察與重量對(duì)比驗(yàn)證）

（二）活性保護(hù)效果分析

本次實(shí)驗(yàn)采用酵母粉模擬益生菌，其耐受性與益生菌具有相似性。實(shí)驗(yàn)中濃縮溫度控制在 4℃，且采用 1500rpm 溫和離心力，避免了高溫與強(qiáng)機(jī)械力對(duì)菌體的損傷；同時(shí)，真空環(huán)境下溶劑快速蒸發(fā)，縮短了菌體在環(huán)境中的暴露時(shí)間。結(jié)合凈信濃縮儀的工藝設(shè)計(jì)特性，可推斷該濃縮過程能有效保護(hù)益生菌的活性，避免因濃縮操作導(dǎo)致的菌體失活。

（三）技術(shù)優(yōu)勢(shì)總結(jié)

溫和濃縮，活性保障：4℃低溫 + 1500rpm 溫和離心的組合，從溫度與機(jī)械力兩方面減少對(duì)益生菌的損傷，解決了傳統(tǒng)濃縮技術(shù)中活性易流失的痛點(diǎn)；

濃縮效率高，產(chǎn)物形態(tài)優(yōu)：4h 內(nèi)即可將 5ml 菌懸液濃縮為干粉，濃縮倍數(shù)顯著，且干粉疏松均一，便于后續(xù)溶解、制劑或儲(chǔ)存；

操作簡(jiǎn)便，重復(fù)性好：儀器參數(shù)精準(zhǔn)可控，平行樣品結(jié)果一致性高，為工業(yè)化批量生產(chǎn)提供了可復(fù)制的工藝基礎(chǔ)。

五、實(shí)驗(yàn)結(jié)論與應(yīng)用展望

（一）實(shí)驗(yàn)結(jié)論

本次實(shí)驗(yàn)成功利用凈信低溫真空離心濃縮儀對(duì)模擬益生菌發(fā)酵液進(jìn)行了預(yù)濃縮，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：① 該技術(shù)用于益生菌濃縮具有可行性，4h 內(nèi)可將樣品濃縮為干粉狀，濃縮效率優(yōu)異；② 濃縮過程溫和，能有效保護(hù)菌體活性（通過低溫與溫和離心實(shí)現(xiàn)），且濃縮產(chǎn)物均一性好，無結(jié)塊或菌體流失問題；③ 該工藝操作簡(jiǎn)便、參數(shù)可控，為益生菌濃縮提供了新的技術(shù)路徑。