炮制與超微粉碎對(duì)水蛭藥效影響的初步實(shí)驗(yàn)研究
呂文海1，邱福軍2，王作明3
（1、山東中醫(yī)藥大學(xué)，山東 濟(jì)南 350014；2.中國(guó)藥材公司，北京 100062；3、山東省委醫(yī)院，山東 濟(jì)南250001）
[摘要] 目的：比較水蛭煎劑、普通散劑的藥效以及新法炮制與超微粉碎對(duì)其藥效的影響。方法：用BT-1500型離心沉降式粒度分布儀測(cè)定了生、制水蛭超微散的粒度。通過小鼠抗凝血、抗血栓作用，比較了水蛭絲水煎劑1/2煎劑劑量的普通散、超微散、制水蛭超微散的藥效。并對(duì)其安全性進(jìn)行了考察。結(jié)果：供試品藥效由強(qiáng)到弱為制水蛭超微散、生水蛭超微散、生水蛭散、生水蛭水煎劑、對(duì)照組。結(jié)論：水蛭經(jīng)超微粉碎，尤其是新法炮制后超微粉碎，可明顯改善氣味、口感，提高藥效。
[關(guān)鍵詞] 水蛭；新法炮制；超微粉碎；增效
[中圖分類號(hào)] R283.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]B[文章編號(hào)] 1001-5302（2001）04-0241-04
水蛭作為經(jīng)典的破血逐瘀藥，近代在中醫(yī)臨床與中成藥生產(chǎn)中得到了愈來愈廣泛的應(yīng)用，并成為了一種世界性藥物。經(jīng)前期工作，初步證明水蛭的主流藥用品種為螞蟥（寬體金線蛭Whit mania pigra Whit man）；切絲入藥優(yōu)于《藥典》規(guī)定的切段入藥；生用在活血化瘀等藥效方面，優(yōu)于傳統(tǒng)燙制品；按新法制成的制水蛭能在改善原藥氣味的同時(shí)，較好的保存其內(nèi)在成分，且溶出效果及抗凝血、抗血栓、降低血小板聚集率、改善微循環(huán)、降膽固醇等藥效學(xué)指標(biāo)，均優(yōu)于傳統(tǒng)燙制水蛭，部分指標(biāo)也優(yōu)于生水蛭，有保質(zhì)增效的趨勢(shì)[1]。但水蛭在臨床應(yīng)用中入湯劑味劣難服，易反胃敗胃。臨床中亦有研末或裝膠囊吞服效優(yōu)的經(jīng)驗(yàn)。
近幾年由于超微粉碎技術(shù)的發(fā)展，可達(dá)到使動(dòng)、植物細(xì)胞90%以上破壁的細(xì)度。由于粒度的減小，也有利于改善藥物的氣味及服用口感。鑒于水蛭經(jīng)炮制和超微粉碎后有無藥效與應(yīng)用方面的優(yōu)勢(shì)，未見報(bào)道，筆者對(duì)此作了初步的實(shí)驗(yàn)研究。
1實(shí)驗(yàn)材料
1.1供試材料
水蛭購自山東省立醫(yī)院，經(jīng)李定格、李峰老師鑒定為螞蟥（寬體金線蛭Whit mania pigra Whitman）。
1.2供試品制備
水蛭絲：原藥材挑去雜質(zhì)，擦凈，蓋濕紗布略潤(rùn)后切2~3mm細(xì)絲。在切制過程中發(fā)現(xiàn)，部分藥材中間填充有白色結(jié)晶性粉末，口嘗無咸、澀味、初步印象為石膏，切絲晾干后過篩可大部脫落。經(jīng)紫外燈照射45min后密閉備用。
生水蛭水煎液：凈水蛭絲2.6g，加10倍量水浸泡30min，微沸30min，過濾，藥渣加8倍量水，微沸30min，過濾，合并濾液，定容100ml，濃度為26˙ml-1。
生水蛭普通散：凈水蛭絲經(jīng)粉碎研磨過100目篩。
生水蛭超微散：凈水蛭絲經(jīng)SQW-6型三清微粉機(jī)粉碎。出料溫度35~40℃。
制水蛭超微散：凈水蛭絲酒潤(rùn)麩制炮制后，SQW-6型三清微粉機(jī)粉碎。出料溫度同上。
3種散劑均平鋪一薄層，經(jīng)紫外燈照射45min后，密切保存?zhèn)溆谩?/div>
1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與儀器
昆明種小鼠（山東中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物房提供）：SQW-6型三清微粉機(jī)；BT-1500型離心沉降式粒度分布儀。
2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果
1.1水蛭超微散粒度的測(cè)定
按《藥典》規(guī)定，水蛭普通散的粒度為（150±6）?m。生、制水蛭超微散的粒度經(jīng)BT-1500型離心沉降式粒度分布儀測(cè)定，結(jié)果見表1、表面化。實(shí)驗(yàn)表明，生、制水蛭經(jīng)微粉機(jī)粉碎，可使其中位徑分別達(dá)到10.24?m和7.79?m；zui大粒徑分別為72?m和24.81?m；50%的粒度在10?m和8?m以下，90%的粒度在50?m和23?m以下，確能達(dá)到超微的效果，而且經(jīng)新法炮制后更利于粉碎，其粒度明顯小于生水蛭。
表1生水蛭超微粉粒度分布測(cè)試結(jié)果
粒徑 區(qū)間頻率 累積頻率
/?m /% /%
0.00~1.00 3.33 3.30
1.00~2.00 4.70 8.80
2.00~3.00 4.93 12.93
3.00~4.00 5.38 18.32
4.00~5.00 5.27 23.59
5.00~6.00 4.71 28.30
6.00~7.00 5.40 33.70
7.00~8.00 5.79 39.49
8.00~9.00 5.50 44.99
9.00~10.00 4.23 49.22
10.00~11.00 3.86 53.08
11.00~12.00 0.72 53.80
12.00~13.00 0.00 53.80
13.00~14.00 0.78 54.58
14.00~15.00 3.15 57.73
15.00~20.00 10.59 68.31
20.00~30.00 20.19 88.50
30.00~40.00 1.13 89.63
40.00~50.00 1.02 90.65
50.00~60.00 6.19 96.84
60.00~70.00 3.05 99.89
70.00~72.00 0.11 100.00
72.00~73.00 0.00 100.00
73.00~74.00 0.00 100.00
注：中位徑10.24?m zui大粒徑72?m
2.2 供試品對(duì)小鼠凝血時(shí)間的影響取體重（28±3）g的成年雄性小鼠，隨機(jī)分為5組。水蛭煎劑組以0.4mg˙g-1劑量灌胃。3種散劑組每天灌胃臨時(shí)配成13mg˙ml-1的混懸液，以0.2mg˙g-1的劑量灌胃（煎劑的1/2量）。用生理鹽水作對(duì)照。每天3次，連續(xù)給藥3d ,第4天給藥1h后，從小鼠眼內(nèi)毗球后靜脈叢取血，按毛細(xì)管法[2]，測(cè)定各組小鼠的凝血時(shí)間，經(jīng)t檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果見表3。實(shí)驗(yàn)表明，水蛭煎劑與水蛭散劑均有確切的抗凝活性。1/2劑量的散劑，其抗凝效果優(yōu)于湯劑。超微散的抗凝活性有優(yōu)于普通散的趨勢(shì)，制水蛭超微散又明顯優(yōu)于生水蛭超微散。提示水蛭用新法炮制和超微粉碎后有利于增強(qiáng)其抗凝活性。
表2 制水蛭超策粉粒度分布測(cè)試結(jié)果
粒徑 區(qū)間頻率 累積頻率
/?m /% /%
0.00~1.00 2.59 2.59
1.00~2.00 4.19 6.77
2.00~3.00 6.51 13.28
3.00~4.00 5.22 18.50
4.00~5.00 12.06 30.56
5.00~6.00 6.20 36.75
6.00~7.00 7.03 43.79
7.00~8.00 6.26 50.05
8.00~9.00 6.85 56.89
9.00~10.00 2.84 59.73
10.00~11.00 3.51 63.24
11.00~12.00 0.64 63.88
12.00~13.00 0.00 63.88
13.00~14.00 0.72 64.60
14.00~15.00 2.77 67.37
15.00~20.00 4.09 71.46
20.00~30.00 4.75 76.21
30.00~40.00 1.99 78.20
40.00~50.00 3.38 81.58
50.00~60.00 2.16 83.74
60.00~70.00 1.92 85.66
70.00~72.00 4.61 90.27
72.00~73.00 6.17 96.43
73.00~74.00 3.57 100.00
注：中位徑7.97?m zui大粒徑24.81?m
表3 供銷試品對(duì)小鼠凝血時(shí)間的影響
組別 n 劑量 凝血時(shí)間 p
/mg˙g-1 /min
生理鹽水 10 0.4 2.96±1.43
生水蛭水煎劑 13 0.4 4.95±2.32 ＜0.05（）
生水蛭普通劑 14 0.2 6.23±2.73 ＞0.05（）
生水蛭超微散 13 0.2 6.33±2.60 ＞0.05（）
制水蛭超微散 13 0.2 9.38±2.19 ＜0.01（）
注：（）示該組與上一組比較
2.3 供試品對(duì)小鼠出血時(shí)間的影響
取體重（28±3）g的成年雄性小鼠，隨機(jī)分為5組。以上法相同劑量給小鼠灌胃3d，每天2次，第4天給藥1h，用剪尾法[2]測(cè)定各組小鼠剪尾5mm的出血時(shí)間，結(jié)果見表4。實(shí)驗(yàn)表明，生水蛭水煎液與對(duì)照組相比，雖有作用增強(qiáng)的趨勢(shì)但無顯著性差異，而普通散劑組呈顯著性差異，兩種超微散均為極顯著性差異，制超微散更優(yōu)。
表4 供試品對(duì)小鼠出血時(shí)間的影響
組別 n 劑量 凝血時(shí)間 p
/mg˙g-1 /min
生理鹽水 10 0.4 7.95±2.58
生水蛭水煎劑 10 0.4 10.28±3.19 ＞0.05（）
生水蛭普通散 12 0.2 14.32±7.08 ＜0.05（）
生水蛭超微散 12 0.2 15.42±5.09 ＜0.01（）
制水蛭超微散 10 0.2 16.45±4.55 ＜0.01（）
注：（）示與NS組比較
2.4 供試品對(duì)小鼠體內(nèi)抗栓作用的影響
抗栓實(shí)驗(yàn)方法學(xué)研究認(rèn)為，在（37±1）℃的生理鹽水中，測(cè)定小鼠尾出血時(shí)間，與鼠頸動(dòng)脈旁路血栓形成法具有很好的平行性。可作為一種簡(jiǎn)便易行的抗血栓形成藥物的體內(nèi)初篩法用于實(shí)驗(yàn)[3]。取體重（20±2）g的雄性小鼠隨機(jī)分為5組，以給定劑量灌胃3d，第4天給藥1h后，將小鼠固定，距尾尖3mm處剪斷，垂直放放（37±1）℃生理鹽水中，使尾端在液面下3cm，記錄出血時(shí)間，結(jié)果見表5。實(shí)驗(yàn)表明，體內(nèi)抗栓作用，也以超微散為優(yōu)，但生、制品之間的差異不明顯。
表5供試品對(duì)小鼠體內(nèi)抗栓作用比較
組別 n 劑量 凝血時(shí)間 p
/mg˙g-1 /min
生理鹽水 10 0.3ml 0.95±0.22
生水蛭水煎劑 10 0.390 1.09±0.25 ＞0.05（）
生水蛭普通散 12 0.195 1.24±0.59 ＞0.05（）
生水蛭超微散 10 0.195 1.66±0.76 ＜0.05（）
制水蛭超微散 10 0.195 1.69±0.53 ＜0.01（）
注：（）示與NS組比較
2.4對(duì)小鼠安全性的考察
水蛭經(jīng)炮制和超微粉碎后藥效有所增強(qiáng)，其毒性是否增大？為此考察了供試品對(duì)小鼠的安全性。取體重（20±2）g的健康小鼠80只，隨機(jī)分為4組，1組給予1300/mg˙ml-1的水煎液，0.4ml/只，3次/d，1.56g˙d-1（相當(dāng)于《藥典》規(guī)定的成人每日湯劑服用量的200倍）。其余3組分別給予130/mg˙ml-1的生水蛭普通通散、超微散和制水蛭超微散0.3ml/只，3次/d，117mg˙d-1（此為能通過灌胃器的散劑zui大劑量，相當(dāng)于《藥典》規(guī)定成人每日服粉末量的30倍），給藥后觀察1周，結(jié)果小鼠活動(dòng)、糞便、毛色正常，無死亡。每組平均體重增加6~8g，說明水蛭經(jīng)新法炮制和超微粉碎后用藥是安全的。該結(jié)果與前期工作和水蛭的亞急性毒性報(bào)道[4]相一致，支持臨床中認(rèn)為“水蛭系療效的無毒品”的觀點(diǎn)。
3 小結(jié)與討論
3.1水蛭絲入藥，既有利于其藥物成分的煎 出，又有利于祛除水蛭體內(nèi)人為摻入雜質(zhì)，優(yōu)于《藥典》規(guī)定的切段入藥。
3.2 生水蛭經(jīng)超微粉碎，90%的粒度為普通散的1/4，50%的粒度為普通散的1/15，且顏色變淺，腥味降低，質(zhì)地細(xì)膩，利于吞服。1/2煎劑劑量的抗凝血、抗血栓作用優(yōu)于水蛭絲煎劑，肯定更優(yōu)于《中國(guó)藥典》2000年版規(guī)定的水蛭段煎劑，證明多數(shù)臨床經(jīng)驗(yàn)認(rèn)為水蛭服散效優(yōu)是正確的，利用超微技術(shù)將更有利于水蛭藥效的發(fā)揮。
1.3水蛭經(jīng)新法炮制后，有利于矯正其氣味，超微粉碎后其粒度也小于生水蛭，zui大粒徑為生水蛭超微粉1/3，僅為24?m。實(shí)驗(yàn)藥效指標(biāo)在3種散劑中呈*趨勢(shì)，值得進(jìn)一步深入研究及推廣應(yīng)用。
1.4雖然藥物粒度的減小，有利于其溶解吸收并改善氣味口感，但也會(huì)引起表面能和穩(wěn)定性等方面的變化。制水蛭超微粉的穩(wěn)定性及*粒度范圍等問題，還有待于進(jìn)一步研究。
1.5水蛭作為一種世界性藥物，研究zui多的品種是日本醫(yī)蛭（Hirude nipponica Whitman），而我國(guó)臨床用藥的主流商品是寬體金線蛭。該品種有效部位及有效成分的研究，目前幾近空白。深入研究其成分，將有利于飲片質(zhì)量的控制和炮制原理的研究，此類探索目前正在進(jìn)行之中。
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